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茁彩生物?走進EdU系列熒光染色

發(fā)布時間: 2023-05-23  點擊次數(shù): 589次

細胞增殖、細胞周期、細胞毒性、DNA復制及修復、信號通路等是測定DNA合成情況研究方向的常用方法之一,用到的檢測試劑主要是胸腺嘧啶核苷酸類似物(BrdU 、EdU ),兩種試劑在檢測方面有一些不同之處。

  • BrdU免疫檢測需要變性DNA后才能與抗體結(jié)合,

  • EdU因為其炔羥基團可以與一些熒光染料發(fā)生“Click"化學反應,無需變形,從而將細胞標記上熒光,因此應用更廣泛。






EdU和Brdu檢測區(qū)別

Brdu 檢測增殖細胞的特點及原理

Brdu(5-bromodeoxyuridine)是一種假核苷酸,它被用來檢測細胞增殖。它可以通過與正常DNA堿基結(jié)合,從而替換掉正常DNA。Brdu在細胞分裂時被復制到DNA中,并在細胞內(nèi)存在一段時間,因此它可以用來指示哪些細胞正在增殖。

Brdu檢測的基本原理是:在細胞增殖過程中,Brdu會被復制到DNA中,并與DNA堿基結(jié)合。這些DNA含有Brdu的細胞可以通過免疫組化或FISH技術(shù)被檢測出來。

Brdu的檢測可以用于研究細胞的生長和分裂,也可以用于檢測癌癥細胞的增殖和活動。例如,Brdu可以用來檢測腫瘤細胞中的DNA損傷,以及化療藥物對腫瘤細胞的作用。

Brdu也可以用于檢測免疫系統(tǒng)中的細胞,例如檢測T細胞增殖以及抗原激活的活性T細胞。此外,Brdu也可以用來檢測神經(jīng)細胞的發(fā)育。

Brdu檢測是一種有效的檢測細胞增殖的方法,它可以用來研究細胞的生長、分裂和發(fā)育,以及腫瘤細胞的活動和化療藥物的作用。

brdu.png


EdU 檢測增殖細胞的特點及原理

EdU(5‐ethynyl‐2′‐deoxyuridine,5‐乙炔基‐2′脫氧尿嘧啶核苷)也是一種胸腺嘧啶核苷的類似物,其化學結(jié)構(gòu)特點是脫氧胸腺嘧啶環(huán)上與5位C原子相連的甲基被乙炔基取代,在S期細胞增殖時可作為底物摻入到正在復制的DNA鏈中,

EdU在細胞增殖時能夠插入正在復制的DNA分子中,基于EdU與染料的共軛反應可以有效地檢測處于S期的細胞百分數(shù)。熒光染料可以同EdU發(fā)生“Click"化學反應(點擊法),從而將增殖的細胞標記上熒光。可用于細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測、線粒體活性檢測以及病毒增殖活性檢測等,EdU亦適用于活體注射,穩(wěn)定,對活體沒有副作用。

與傳統(tǒng)的免疫熒光染色(BrdU)檢測方法相比,EdU檢測法更簡單、更快速、更準確,不需要嚴格的樣品變性(酸解、熱解、酶解)處理,有效地避免了樣品損傷,有助于在組織、器官的整體水平上觀測細胞增殖的真實情況,具有更高的靈敏度和更快的檢測速度。



EdU和Brdu檢測區(qū)別見下表




Edu

Brdu

分子量大小

252.22 g·mol?1

307.098 g·mol?1

標記檢測方式

化學反應(點擊法)

免疫反應

是否影響其他標記

不影響

影響

DNA是否變性

標記檢測時長

≤2.5 h

過夜

檢測靈敏度

一般




EdU檢測的優(yōu)點:

1、更簡單:僅需EdU孵育;無需抗原抗體反應,基于小分子化學反應的檢測方法簡單高效,反應僅需要幾分鐘;

2、更靈敏:無需抗體,檢測染料僅BrdU抗體的1/500,很容易擴散,即便是單個增殖細胞也能準確檢測;

3、更快速:無需過夜,省卻了抗原抗體反應的復雜繁瑣步驟,只需2.5 h;

4、更準確:無需DNA變性(酸解、熱解、酶解等),可有效避免變性帶來的樣品損傷,確保細胞核邊緣清晰完整;

5、更兼容:允許與多種抗體、熒光染料同時標記;對樣品幾乎無損傷,更容易與多種抗體或熒光蛋白同時標記,能夠同時檢測細胞其他性狀特征;

6、應用性廣,細胞成像、流式、細胞示蹤、DNA損傷修復檢測、病毒增殖活性檢測,適用于各種動物細胞檢測,對植物細胞亦適用。



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